دا مقاله تاسو ته درکوي چې څنګه د مایع کروماتګرافي کالم غوره کړئ

مایع کروماتګرافي په خامو موادو، منځګړیو، تیاریو او بسته بندۍ موادو کې د هرې برخې محتوا او ناپاکتیا ازموینې اصلي میتود دی، مګر ډیری مادې د تکیه کولو لپاره معیاري میتودونه نلري، نو د نوي میتودونو رامینځته کول ناگزیر دي. د مایع مرحلې میتودونو په پراختیا کې ، کروماتګرافیک کالم د مایع کروماتګرافي اساس دی ، نو څنګه د مناسب کروماتګرافیک کالم غوره کول خورا مهم دي. پدې مقاله کې ، لیکوال به تشریح کړي چې څنګه د دریو اړخونو څخه د مایع کروماتګرافي کالم غوره کړئ: ټولیز نظرونه ، نظرونه او د غوښتنلیک ساحه.

A. د مایع کروماتګرافي کالمونو غوره کولو لپاره ټولیز نظرونه

1. د تحلیل کونکي فزیکي او کیمیاوي ملکیتونه ارزونه: لکه کیمیاوي جوړښت، محلول، ثبات (لکه آیا دا په اسانۍ سره اکسیډیز شوی/کمول/هایډرولیز شوی دی)، تیزابیت او الکلینیت، او داسې نور، په ځانګړې توګه د کیمیاوي جوړښت کلیدي ده. د ملکیتونو په ټاکلو کې فکتور، لکه د کنجګیټ ګروپ قوي الټرا وایلیټ جذب او قوي فلوروسینس لري؛

2. د تحلیل هدف مشخص کړئ: ایا لوړ جلا کول، د کالم لوړ موثریت، د لنډ تحلیل وخت، لوړ حساسیت، د لوړ فشار مقاومت، اوږد کالم ژوند، ټیټ لګښت، او داسې نور.

1. یو مناسب کروماتګرافیک کالم غوره کړئ: د کروماتګرافیک فلر جوړښت ، فزیکي او کیمیاوي ملکیتونه درک کړئ ، لکه د ذرې اندازه ، د سور اندازه ، د تودوخې زغم ، pH زغم ، د تحلیل جذب او داسې نور.

1. د مایع کروماتګرافي کالمونو غوره کولو لپاره نظرونه

دا څپرکی به د هغه فکتورونو په اړه بحث وکړي چې باید په پام کې ونیول شي کله چې د کروماتګرافي کالم غوره کول پخپله د کروماتګرافي کالم د فزیکي او کیمیاوي ملکیتونو له لید څخه. 2.1 ډکونکی میټریکس

2.1.1 د سیلیکا جیل میټریکس د ډیری مایع کروماتګرافي کالمونو فلر میټریکس سیلیکا جیل دی. دا ډول ډکونکی لوړ پاکوالی، ټیټ لګښت، لوړ میخانیکي ځواک لري، او د ګروپونو تعدیل کول اسانه دي (لکه د فینیل بانډینګ، امینو بانډینګ، سیانو بانډینګ، او نور)، مګر د pH ارزښت او د تودوخې حد محدود دی: د ډیری سیلیکا جیل میټریکس فلرونو pH حد له 2 څخه تر 8 پورې دی ، مګر د ځانګړي تعدیل شوي سیلیکا جیل بانډ شوي مرحلو pH حد ممکن له 1.5 څخه تر 10 پورې پراخه وي ، او دلته ځانګړي تعدیل شوي سیلیکا جیل بانډ شوي مرحلې هم شتون لري چې په ټیټ pH کې مستحکم دي ، لکه Agilent ZORBAX RRHD stablebond-C18، کوم چې د pH 1 څخه تر 8 پورې ثبات لري؛ د سیلیکا جیل میټرکس پورتنۍ تودوخې حد معمولا 60 ℃ دی ، او ځینې کروماتګرافي کالمونه کولی شي په لوړ pH کې د 40 ℃ تودوخې برداشت کړي.

2.1.2 پولیمر میټرکس پولیمر فلرونه اکثرا پولیسټرین - ډیویینیل بینزین یا پولی میتاکرایټ دي. د دوی ګټې دا دي چې دوی کولی شي د pH پراخه حد برداشت کړي - دوی د 1 څخه تر 14 درجو کې کارول کیدی شي ، او دوی د لوړې تودوخې په وړاندې مقاومت لري (د 80 درجو څخه پورته کیدی شي). د سیلیکا میشته C18 فلرونو سره پرتله کول ، دا ډول ډکونکی قوي هایدروفوبیکیت لري ، او میکروپورس پولیمر د نمونو لکه پروټینونو جلا کولو کې خورا مؤثره دی. د دې نیمګړتیاوې دا دي چې د کالم موثریت ټیټ دی او میخانیکي ځواک د سیلیکا پراساس فلرونو په پرتله ضعیف دی. 2.2 د ذرې شکل

ډیری عصري HPLC ډکونکي کروی ذرات دي، مګر ځینې وختونه دا غیر منظم ذرات دي. کروی ذرات کولی شي د ټیټ کالم فشار، لوړ کالم موثریت، ثبات او اوږد ژوند چمتو کړي؛ کله چې د لوړ ویسکوسیټي ګرځنده مرحلو څخه کار واخلئ (لکه فاسفوریک اسید) یا کله چې د نمونې محلول ویسکوس وي ، غیر منظم ذرات د سطحې پراخه ساحه لري ، کوم چې د دوه مرحلو بشپړ عمل لپاره خورا مناسب دی ، او نرخ نسبتا ټیټ دی. 2.3 د ذرې اندازه

د ذرې اندازه کوچنۍ وي، د کالم موثریت لوړ وي او د جلا کولو لوړوالی، مګر د لوړ فشار مقاومت خورا خراب دی. ترټولو عام کارول شوی کالم د 5 μm د ذرې اندازه کالم دی؛ که د جلا کولو اړتیا لوړه وي ، د 1.5-3 μm ډکونکی غوره کیدی شي ، کوم چې د ځینې پیچلي میټریکس او څو اجزاو نمونو د جلا کولو ستونزې حل کولو لپاره مناسب دی. UPLC کولی شي د 1.5 μm ډکونکي وکاروي؛ د 10 μm یا لوی ذرات اندازه ډکونکي اکثرا د نیم چمتو کونکي یا چمتو کولو کالمونو لپاره کارول کیږي. 2.4 د کاربن مواد

د کاربن مینځپانګه د سیلیکا جیل په سطحه د تړل شوي مرحلې تناسب ته اشاره کوي ، کوم چې د ځانګړي سطحې ساحې او تړل شوي مرحلې پوښښ پورې اړه لري. د لوړ کاربن مینځپانګه د لوړ کالم ظرفیت او لوړ ریزولوشن چمتو کوي ، او ډیری وختونه د پیچلو نمونو لپاره کارول کیږي چې لوړې جلا کولو ته اړتیا لري ، مګر د دوه مرحلو ترمینځ د اوږد تعامل وخت له امله ، د تحلیل وخت اوږد دی؛ د کم کاربن مینځپانګې کروماتګرافیک کالمونه د تحلیل لنډ وخت لري او کولی شي مختلف انتخابونه وښیې ، او ډیری وختونه د ساده نمونو لپاره کارول کیږي چې ګړندي تحلیل او نمونې ته اړتیا لري چې د لوړ آبي مرحلو شرایطو ته اړتیا لري. عموما، د C18 کاربن مواد له 7٪ څخه تر 19٪ پورې وي. 2.5 د سوري اندازه او د سطحې ځانګړې ساحه

د HPLC جذب میډیا سوري ذرات دي، او ډیری تعاملات په سوري کې ترسره کیږي. نو ځکه، مالیکولونه باید د جذب او جلا کولو لپاره سوری ته ننوځي.

د پور اندازه او د سطحې ځانګړې ساحه دوه بشپړونکي مفکورې دي. د کوچني سوري اندازه د لوی ځانګړي سطحې ساحې معنی لري، او برعکس. د سطحې یوه لویه ځانګړې ساحه کولی شي د نمونې مالیکولونو او تړل شوي مرحلو ترمنځ تعامل زیات کړي، د ساتلو زیاتوالی، د نمونې بارولو او د کالم ظرفیت زیات کړي، او د پیچلو اجزاوو جلا کول. په بشپړ ډول سوري ډکونکي د دې ډول ډکونکو پورې اړه لري. د هغو کسانو لپاره چې د جلا کولو لوړې اړتیاوې لري، دا سپارښتنه کیږي چې د لوی ځانګړي سطحې ساحې سره ډکونکي غوره کړئ؛ د سطحې کوچنۍ ځانګړې ساحه کولی شي د شا فشار کم کړي، د کالم موثریت ته وده ورکړي، او د توازن وخت کم کړي، کوم چې د تدریجي تحلیل لپاره مناسب دی. د کور شیل ډکونکي د دې ډول ډکونکو پورې اړه لري. د جلا کولو تضمین کولو په اساس، دا سپارښتنه کیږي چې د هغو کسانو لپاره چې د لوړ تحلیل موثریت اړتیاوې لري د کوچنۍ ځانګړې سطحې ساحې سره ډکونکي غوره کړئ. 2.6 د سور حجم او میخانیکي ځواک

د پور حجم، چې د "پوري حجم" په نوم هم پیژندل کیږي، د هر واحد ذرې د باطل حجم اندازې ته اشاره کوي. دا کولی شي د ډکونکي میخانیکي ځواک ښه منعکس کړي. د لوی سور حجم سره د فلرونو میخانیکي ځواک د کوچني سور حجم سره د فلرونو په پرتله یو څه کمزوری دی. د 1.5 mL/g څخه کم یا مساوي د پور حجم ډکونکي اکثرا د HPLC جلا کولو لپاره کارول کیږي ، پداسې حال کې چې د 1.5 mL/g څخه ډیر د پور حجم لرونکي ډکونکي په عمده ډول د مالیکول خارج کولو کروماتګرافي او ټیټ فشار کروماتګرافي لپاره کارول کیږي. 2.7 د کیپینګ نرخ

کیپ کول کولی شي د ټیلینګ چوټي کم کړي چې د مرکبونو او افشا شوي سیلانول ګروپونو ترمینځ د متقابل عمل له امله رامینځته کیږي (لکه د الکلین مرکبونو او سیلانول ګروپونو ترمینځ ایونیک اړیکې ، د وین ډر وال ځواک او د تیزابي مرکبونو او سیلانول ډلو ترمینځ هایدروجن بانډونه) ، پدې توګه د کالم موثریت او د چوټي شکل ښه کوي. . د بند تړل شوي پړاوونه به د تړل شوي بند شوي پړاوونو په پرتله مختلف انتخابونه تولید کړي، په ځانګړې توګه د قطبي نمونو لپاره.

1. د مختلف مایع کروماتګرافي کالمونو د غوښتنلیک ساحه

دا څپرکی به د ځینو قضیو له لارې د مایع کروماتګرافي کالمونو مختلف ډولونو غوښتنلیک ساحه تشریح کړي.

3.1 بدل شوی پړاو C18 کروماتګرافیک کالم

د C18 کالم تر ټولو عام کارول شوی د بیرته راګرځیدونکي پړاو کالم دی، کوم چې کولی شي د ډیری عضوي موادو محتوا او ناپاکۍ ازموینې پوره کړي، او په منځني قطبي، ضعیف قطبي او غیر قطبي موادو باندې تطبیق کیږي. د C18 کروماتګرافیک کالم ډول او مشخصات باید د ځانګړي جلا کولو اړتیاو سره سم وټاکل شي. د مثال په توګه، د هغو موادو لپاره چې د لوړ جلا کولو اړتیاوې لري، 5 μm*4.6 mm*250 mm مشخصات اکثرا کارول کیږي؛ د هغو موادو لپاره چې د پیچلي جلا کولو میټریکونو او ورته قطبیت سره، 4 μm * 4.6 mm * 250 mm مشخصات یا د کوچنیو ذراتو اندازه کارول کیدی شي. د مثال په توګه، لیکوال 3 μm*4.6 mm*250 mm کالم کارولی ترڅو په celecoxib API کې دوه جینټوکسیک ناپاکۍ کشف کړي. د دوو موادو جلا کول کولی شي 2.9 ته ورسیږي، کوم چې خورا ښه دی. برسېره پر دې، د جلا کولو د یقیني کولو لپاره، که چټک تحلیل ته اړتیا وي، د 10 mm یا 15 mm لنډ کالم اکثرا غوره کیږي. د مثال په توګه، کله چې لیکوال LC-MS/MS کارولی ترڅو په پائپراکین فاسفیټ API کې د جینټوکسیک ناپاکۍ کشف کړي، د 3 μm * 2.1 mm * 100 mm کالم کارول شوی و. د ناپاکۍ او اصلي برخې تر مینځ جلا کول 2.0 و، او د نمونې کشف په 5 دقیقو کې بشپړ کیدی شي. 3.2 د بیرته راګرځیدونکي پړاو فینیل کالم

د فینیل کالم هم د بیرته راګرځیدونکي پړاو کالم یو ډول دی. دا ډول کالم د اروماتیک مرکباتو لپاره قوي انتخاب لري. که د عادي C18 کالم لخوا اندازه شوي د اروماتیک مرکباتو غبرګون ضعیف وي، تاسو کولی شئ د فینیل کالم ځای په ځای کولو غور وکړئ. د مثال په توګه، کله چې زه celecoxib API جوړوم، د اصلي برخې غبرګون د ورته جوړونکي د فینیل کالم لخوا اندازه شوی او ورته مشخصات (ټول 5 μm * 4.6 mm * 250 mm) د C18 کالم شاوخوا 7 ځله و. 3.3 د نورمال پړاو کالم

د بیرته راګرځیدونکي مرحلې کالم لپاره د مؤثره ضمیمه په توګه، د نورمال پړاو کالم د لوړ قطبي مرکباتو لپاره مناسب دی. که چیرې چوکۍ لاهم خورا ګړندۍ وي کله چې د بیرته راګرځیدلي مرحلې کالم کې له 90٪ څخه ډیر آبی پړاو سره خلاصیږي ، او حتی د محلول چوټي سره نږدې او ډیریږي ، تاسو کولی شئ د نورمال مرحلې کالم ځای په ځای کولو باندې غور وکړئ. په دې ډول کالم کې د هیلیک کالم، امینو کالم، سیانو کالم، او نور شامل دي.

3.3.1 Hilic column Hilic کالم معمولا د هایدروفیلیک ګروپونه په تړل شوي الکیل سلسله کې ځای په ځای کوي ترڅو د قطبي موادو په وړاندې غبرګون لوړ کړي. دا ډول کالم د شکرې موادو تحلیل لپاره مناسب دی. لیکوال دا ډول کالم کارولی کله چې د xylose او د هغې مشتق مواد او اړونده مواد ترسره کوي. د xylose مشتق isomers هم ښه جلا کیدی شي؛

3.3.2 د امینو کالم او سیانو کالم امینو کالم او سیانو کالم په ترتیب سره د بند شوي الکیل سلسلې په پای کې د امینو او سیانو تعدیلاتو معرفي کولو ته اشاره کوي، ترڅو د ځانګړو موادو لپاره انتخاب ښه کړي: د بیلګې په توګه، امینو کالم یو ښه انتخاب دی. د شکرو، امینو اسیدونو، اډو او امایډونو جلا کولو لپاره؛ د سیانو کالم غوره انتخابي وړتیا لري کله چې د هایدروجن شوي او غیر هایدروجن شوي ساختماني ورته موادو جلا کول د کنجګیټ بانډونو شتون له امله. د امینو کالم او سیانو کالم ډیری وختونه د نورمال مرحلې کالم او ریورس فیز کالم ترمینځ تیر کیدی شي ، مګر د مکرر سویچ کولو سپارښتنه نه کیږي. 3.4 د چیرال کالم

د چایرال کالم، لکه څنګه چې نوم وړاندیز کوي، د چایرال مرکبونو جلا کولو او تحلیل لپاره مناسب دی، په ځانګړې توګه د درملو په ساحه کې. دا ډول کالم په پام کې نیول کیدی شي کله چې دودیز ریورس مرحله او نورمال پړاو کالمونه نشي کولی د isomers جلا کول ترلاسه کړي. د مثال په توګه، لیکوال د 1,2-diphenylethylenediamine دوه isomers جلا کولو لپاره 5 μm * 4.6 mm * 250 mm کریل کالم کارولی: (1S, 2S)-1, 2-diphenylethylenediamine او (1R, 2R)-1, 2 - diphenylethylenediamine، او د دواړو ترمنځ جلاوالی شاوخوا 2.0 ته ورسید. په هرصورت، د چایرال کالمونه د نورو ډولونو کالمونو په پرتله خورا ګران دي، معمولا 1W +/piece. که چیرې داسې کالمونو ته اړتیا وي، نو واحد باید کافي بودیجه جوړه کړي. 3.5 د آیون د تبادلې کالم

د ایون تبادلې کالمونه د چارج شوي ایونونو جلا کولو او تحلیل لپاره مناسب دي، لکه ایونونه، پروټینونه، نیوکلیک اسیدونه، او ځینې شکرې مادې. د ډکونکي ډول سره سم، دوی د کیشن تبادلې کالمونو، د اینون ایکسچینج کالمونو، او قوي کیشن تبادلې کالمونو ویشل شوي دي.

د Cation د تبادلې کالمونه د کلسیم پر بنسټ او د هایدروجن پر بنسټ کالمونه شامل دي، کوم چې په عمده توګه د کیشنیک موادو لکه امینو اسیدونو تحلیل لپاره مناسب دي. د مثال په توګه، لیکوال د کلسیم پر بنسټ کالمونه کارولي کله چې د فلش کولو محلول کې کلسیم ګلوکونیټ او کلسیم اسټیټ تحلیل کوي. دواړه مواد په λ=210nm کې قوي غبرګونونه درلودل، او د جلا کولو درجه 3.0 ته رسیدلې؛ لیکوال د هایدروجن پر بنسټ کالمونه کارولي کله چې د ګلوکوز پورې اړوند موادو تحلیل کوي. ډیری مهمې اړوندې مادې - مالټوز، مالټوټریوز او فرکټوز - د توپیر کشف کونکو الندې لوړ حساسیت درلود، د کشف حد د 0.5 ppm او د جلا کولو درجې 2.0-2.5 سره.

د انون تبادلې کالمونه په عمده ډول د انونیک موادو تحلیل لپاره مناسب دي لکه عضوي اسیدونه او هالوجن آئن؛ د قوي کیشن تبادلې کالمونه د آیون تبادلې لوړ ظرفیت او انتخاب لري، او د پیچلو نمونو جلا کولو او تحلیل لپاره مناسب دي.

پورته یوازې د څو عام مایع کروماتګرافي کالمونو ډولونو او غوښتنلیک لړیو ته پیژندنه ده چې د لیکوال د خپلې تجربې سره یوځای کیږي. په حقیقي غوښتنلیکونو کې د کروماتګرافیک کالمونو نور ځانګړي ډولونه شتون لري، لکه لوی-پوري کروماتګرافیک کالمونه، کوچني-پوري کروماتګرافیک کالمونه، د ارتباط کروماتګرافي کالمونه، ملټي موډ کروماتګرافیک کالمونه، د الټرا-لوړ فعالیت مایع کروماتګرافي کووماتوګرافي (کومیتوګرافیک کولماتوګرافي)، SFC) او داسې نور. دوی په مختلفو برخو کې مهم رول لوبوي. د کروماتګرافیک کالم ځانګړی ډول باید د نمونې جوړښت او ملکیتونو، جلا کولو اړتیاو او نورو موخو سره سم وټاکل شي.